微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)的不確定度如何評(píng)定

　　在ISO/IEC17025《校準(zhǔn)和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》中明確指出實(shí)驗(yàn)室出具的檢測(cè)報(bào)告應(yīng)包含有關(guān)評(píng)定校準(zhǔn)或測(cè)試結(jié)果的不確定度說明，故對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行不確定度的評(píng)定成為檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的重要內(nèi)容。下面是yjbys小編為大家?guī)�來的關(guān)于微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)的不確定度如何評(píng)定的知識(shí)，歡迎閱讀。

　　1 .檢驗(yàn)方法

　　依據(jù) GB 4789.2-2010 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》中要求以無菌操作取檢樣25 g(ml)剪碎放于含有225 ml滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液中，經(jīng)振搖或研磨做成1︰10的均勻稀釋樣液，按照標(biāo)準(zhǔn)要求制備10倍系列稀釋樣品勻液。根據(jù)污染情況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度作2個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入培養(yǎng)基約15~20 ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h±2 h。計(jì)數(shù)后以同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)報(bào)告。

　　2. 數(shù)學(xué)模型

　　設(shè)菌落總數(shù)為A，檢測(cè)結(jié)果為X，則A=X CFU/g(ml)。

　　3 .計(jì)算不確定度

　　3.1 在微生物檢驗(yàn)中，樣品中細(xì)菌分布的均勻性和重復(fù)測(cè)量帶來的不確定度是影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的主要原因，而B類不確定度分量對(duì)合成不確定度影響較少。按 GB 4789.2-2010 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》中方法，同一樣品每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平衡樣，因此可以采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢測(cè)結(jié)果的不確定度 見表1。

　　3.2 從檢驗(yàn)結(jié)果可知，如直接用貝塞爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，由于數(shù)據(jù)的散發(fā)性較大，計(jì)算出的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差很大，當(dāng)樣本均值較小時(shí)其不確定度則會(huì)過大，此時(shí)可以對(duì)上述數(shù)據(jù)取對(duì)數(shù)后，計(jì)算出樣本檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)數(shù)值的均值和殘差，將中間計(jì)算結(jié)果 見表2。根據(jù)貝賽爾公式，可計(jì)算出檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差：

　　取置信水平P=95%，自由度ν=19，查t分布表得：

　　分布于X±0.043之間。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果以平衡樣結(jié)果平均值表示時(shí)，相對(duì)于對(duì)數(shù)值的取值再取反對(duì)數(shù)得其取值區(qū)間。這個(gè)取值區(qū)間適合于任何一次檢測(cè)。

　　3.3 例1：3#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為2.708，取值區(qū)間為2.665～2.751，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為462～564 cfu/g(ml)，菌落總數(shù)的取值區(qū)間為460～560 cfu/g(ml)。

　　例2：12#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為3.203，取值區(qū)間為3.160～3.246，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為1445～1762u/g(ml)，菌落總數(shù)的取值區(qū)間為1400～1800 cfu/g(ml)。

　　例3：18#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為4.0115，取值區(qū)間為3.9685～4.0545，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為9 300～11 337 u/g(ml)，菌落總數(shù)的取值區(qū)間為9 300～11 000 cfu/g(ml)。

　　4 .小結(jié)

　　從以上計(jì)算結(jié)果可知，由于檢驗(yàn)結(jié)果的散發(fā)性較大，如直接用貝賽爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差所得到的不確定度不適合每一個(gè)樣本。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果取對(duì)數(shù)后，用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度則使用方便，并且適合于每一個(gè)樣本。隨著檢驗(yàn)結(jié)果的不斷增加，可隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新其不確定度的取值范圍。

　　微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)的不確定度如何評(píng)定

　　菌落總數(shù)的不確定度可以通過重復(fù)取樣和測(cè)定的方法進(jìn)行評(píng)定。通常采用3次取樣的方式，每次取樣均取同樣數(shù)量的培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)基分別接種于同一試管中，放置在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下培養(yǎng)，直到觀察到有菌落形成。

　　然后對(duì)3次取樣的結(jié)果進(jìn)行計(jì)算和統(tǒng)計(jì)，可以得到平均菌落數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。標(biāo)準(zhǔn)差反映了樣本間的差異性，如果標(biāo)準(zhǔn)差較小，則說明樣本之間的差異性較小，可以認(rèn)為檢驗(yàn)結(jié)果比較可靠。

　　此外，還可以通過分析取樣的誤差來評(píng)定不確定度。誤差可以分為系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差兩種，系統(tǒng)誤差是由于儀器或操作方法等原因引起的誤差，隨機(jī)誤差則是由于操作者的技術(shù)水平和實(shí)驗(yàn)環(huán)境等因素引起的誤差。對(duì)于微生物檢驗(yàn)，系統(tǒng)誤差通常比較小，而隨機(jī)誤差則可能較大。

　　綜合考慮取樣數(shù)量、標(biāo)準(zhǔn)差和誤差等因素，可以評(píng)定微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)的不確定度，以便對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確的解釋和評(píng)價(jià)。